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  • 人參皂苷類中藥如何檢測?看這一篇就夠了~

    發布時間:2024-10-11 來源:

    前言

    人參皂苷是一種固醇類化合物,屬于三萜糖苷類化合物,具有抗氧化、抗炎、血管舒張、抗過敏、抗糖尿病等多種治療作用。此外,人參皂苷還能有效改善傳統化療藥物的療效,防止對正常組織的損傷。由于人參皂苷在人參屬產品中的重要性,其含量的檢測成為了確保產品質量和安全性的關鍵步驟。

    藥典中涉及到人參皂苷的檢測主要有人參、紅參、西洋參、三七等品種,其中樣品中人參皂苷Rg1和Re的檢測是困擾很多分析人員的難點問題。由于Rg1和Re容量因子比較接近,在色譜圖上體現為兩者的保留時間接近,分離度不夠,分析人員需要花費大量的時間進行色譜柱篩選工作。為了解決這一問題,我們整理了2020版《中國藥典》涉及到人參皂苷類檢測的中藥品種,并提出解決方案,解決人參皂苷類中藥檢測難點問題。


    篩選思路
    中國藥典人參皂苷類實驗,屬于標準方法重現,對于人參皂苷Rg1和Re分離度不夠的問題,我們更多是通過篩選色譜柱來解決。藥典對于實驗色譜柱描述是以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱,即C18色譜柱,但是由于鍵合工藝、鍵合相支鏈基團、封尾基團、色譜柱規格等不同,常會導致保留行為差異。本文考察了色譜柱類型、柱長、流速對Rg1和Re分離度的影響,具體結果如下:

    1. 色譜柱類型對分離度影響


    首先查看Alphasil VC-C18上Rg1和Re出峰情況,發現Rg1先出峰。通過計算Rg1和Re的疏水性,發現其疏水性的大小與出峰順序相悖,表明當前體系下出峰順序不單單基于疏水作用力。查看Rg1和Re結構式可知,兩者都含有糖單元,保留強弱是糖單元的數量帶來的親水作用力差異引起。
    通過比較Alphasil VC-C18和Alphasil VC-C18AQ的分離結果,我們發現Alphasil VC-C18AQ整體保留時間會更長,這是因為該色譜柱鍵合相是十八烷基硅烷內嵌酰胺基,而酰胺基是親水基團,會進一步提高色譜柱與Rg1和Re間的作用力。

    2.  柱長對分離度影響


    本文對色譜柱長度進行了考察,結果發現了一個有趣的現象,150mm色譜柱Rg1和Re分離效果優于250mm的色譜柱,如圖2所示。這個結果與我們過往經驗相悖,即相同條件下,色譜柱越長,化合物分離度應該越好。
    針對上述現象,我們進行了探究。眾所周知色譜分離過程是化合物進入色譜柱后在固定相和流動相之間進行分配,多個組分實現分離就是借助不同化合物K'差異。在梯度洗脫過程中,K'不是恒定值,會隨流動相的變化而改變,所以梯度洗脫中常用K'的平均值作為梯度的容量因子。
    式中Vm為色譜柱體積,F為流速,tG/ ΔΦ與梯度相關,S與化合物有關,已知小分子樣品的S值大約為4。因此,當在給定的梯度條件下,化合物的容量因子只與流速F和色譜柱體積Vm有關。
    色譜分析中我們習慣根據K'改變后,化合物間相對保留行為是否改變將化合物分為“常規樣品”和“非常規樣品”。其中常規樣品是K'改變后,相對保留行為不發生改變,非常規樣品剛好相反。我們再回到這個實驗,發現色譜柱長度從150mm變為250mm后,Rg1和Re分離度變差,說明Rg1和Re屬于非常規樣品范疇。為了驗證這一結論,我們設計實驗,改變流速F,考察K'減小后Rg1和Re分離度是否也會變差。結果如圖3所示,我們發現1mL/min流速下分離度小于1.3mL/min,與色譜柱長度改變后得到的分離度變化趨勢一致。


    實驗結果

    為了便于大家對我們的方案有更多了解,在此列舉四種人參皂苷類品種檢測結果,其余品種詳情結果可私信后臺。

    人參

    西洋參

    人參總皂苷

    三七通舒膠囊(三七三醇皂苷)

    人參皂苷類品種及推薦色譜柱

    為了方便大家選擇合適的色譜柱,我們將藥典中人參皂苷的品種和對應的色譜柱匯總如下。

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